Mikroskopija i fotografisanje spora

MikroskopKada smo došli do toga da određene vrste ne možemo makroskopski determinisati, upotreba mikroskopa i posmatranje spora nameću se same po sebi. Tekst koji slijedi pisan je više iz praktičnog iskustva, zasnovanog na on-line resursima i tehnikama koje su se potvrdila u praksi. Ukratko, centar pažnje je bačen na fotografisanje spora, koje mada možda nekom zvuči čudno može biti ostvarivo i interesantno, ali i itekako korisno. Sama metodologija je vrlo praktična, a može biti od koristi svima koji su zainteresovani za mikroskopsko proučavanje gljiva, ali i za fotografisanja spora. Tehnika je skoro u potpunosti preuzet sa website-a Mushroomexpert sa nešto malo izmjena. Pa krenimo!
Prvi korak koji treba da uradimo je da ostavimo klobuk gljive listićima okrenutim ka dole (naravno kod ascomyceta to će biti nešto drugačije, jer im je himenij vanjska strana plodnog tijela), prije toga odstranimo stručak, na crnoj ili bijeloj podlozi 5-6 sati (ponekad je potrebno i da prenoći, sve zavisi u kakvom je stanju i stadiju pronađena gljiva), te ga eventualno prekrijemo staklenom teglom kako bi bilo što manjeg strujanja vazduha. Nakon proteka navedenog vremena podignemo klobuk sa površine papira i otisak spora bi trebao biti tu.
Naredni korak je prenošenje "nekolicine" spora na pokrovno staklo kako bi bili u mogućnosti posmatrati ih pod mikroskopom. Postoji više načina na koji to možemo uraditi.
Na pomenutom website-u preporučuje se da se laganim potezom žileta takoreći ogrebe određeni broj spora, te da ih onda žiletom prenesemo na pokrovno staklo. Ovom postupku treba pokloniti posebnu pažnju kako ne bi ostrugali i mrvice papira na kojem se nalazi otisak spora (supernježni potezi žileta).
Drugi metod, kojeg i ja koristim, sastoji se od toga da se pokrovno staklo jednostavno prisloni na svjež otisak spora i nježno pritisne.. Nakon 5-6 sekundi podigne se pokrovno staklo i spore su tu (nekad i previše u masi, ali nakon dva, tri pokušaja, a ne tako rijetko i iz prvog, mogu se dobiti kvalitetni uzorci). Što se tiče samog mikroskopa, za posmatranje osnovne građe i oblika spora nije nam potreban "supermikroskop". Tehnologija kao i u drugim oblastima grabi snažno naprijed, pa su mogućnosti uvećanja i preciznosti koji nude današnji savremeni mikroskopi donedavno bile nezamislive. Međutim, isto tako je realnost da gotovo niko neće izdvojiti ogromne pare za nešto što će mu biti neka vrsta hobija ili čime se namjerava amaterski baviti kao i ja. Kako mnogi resursi navode dovoljan je mikroskop sa mogućnosti uvećanja od 500 puta pa nadalje. Većina fotografija na ovoj stranici je napravljena sa mikroskopom koji ima uvećanje cca 1000x. Sve detalje oko samih podešavanja preporučujem da pronađete u 15-om broju časopisa "Svet gljiva" u izdanju MDS u kojem su na odličan način objašnjeni svi detalji u vezi sa neophodnim performansama mikroskopa i efikasnim posmatranjem spora, te njihove građe ( link za download on-line izdanja).
Dakle, nakon što smo uspješno prenijeli spore na pokrovno staklo, krećemo sa njihovim posmatranjem od najmanjeg uvećanja, zatim postepeno uvećavamo (mjenjanjem objektiva i okulara, te njihovim kombinacijama) do granice koju nam naš mikroskop dopušta. Za postizanje dobrih rezultata i uvida u građu spora neophodno je korištenje objektiva sa imerzionim uljem (uvećanje 100x), ali neka vas to ne brine jer je i sa manjim uvećanjem moguće napraviti fotografije solidnog kvaliteta (većina fotografija iz galerije spora ispod je napravljena pod uvećanjem dobrano manjim od 1000x, ali su naknadnim cropiranjem i zoomiranjem dobile ovaj oblik).
Fotografisanje spora kao završni stadij možemo izvesti tako što fotoaparat pričvrstimo na stativ (ili ga držimo čvrsto u rukama i uz tijelo-iz razloga što će nam ponekad biti potrebna malo duža ekspozicija), zatim podesimo odgovarajuću ekspoziciju i otvor blende, te "okidamo" veći broj slika dok ne budemo zadovoljni nekom od njih (primjetio sam da su fotografije kvalitetnije ako se osvjetljenje pojača, fotoaparat sa uključenim makrom približimo okularu, a zatim pomalo zoomiramo, sve dok ne pronađemo optimalne uvijete za fotografiju). Jasno je da bolji aparat, svakako pogoduje i kvalitetnijoj fotografiji spora, no pored toga na kvalitet fotografije utiče i sama veličina spora koje posmatramo, jer će manje spore + prosječan mikroskop (sa malim mogućnostima uvećanja) rezultirati i lošijim fotografijama.

Osnovno o sporama

Pholiotina sp.Pored samog otiska spora/plodišta gljive, koji nam pruža podatke o građi himenija gljive, a sama boja otiska nam olakšava determinaciju (ista boja otiska spora karakteristična za pojedine rodove: pluteus-roza; inocybe, cortinarius-smeđkast ...), možemo reći da postoje dva glavna indikatora na mikroskopskoj razini koja nam nakon svih vizuelnih zapažanja upotpunjuju determinaciju tamo gdje je to potrebno.
Prvi od tih pokazatelja je sam oblik spora, odnosno njihov izgled pod mikroskopom, koji može varirati od nepravilnog, elipsoidnog, okruglastog, vretenastog, itd, a drugi je njihova veličina (izražava se u mikrometrima koji imaju oznaku µm i predstavljaju milioniti dio metra) i može se reći da uz eventualnu upotrebu određenih hemijskih reagenasa kompletira sve korake, koji su ponekad neophodni kako bi se pojedine vrste determinisale.
Ono što bi još trebalo istaći jeste da bi se prilkom samog postupka uzimanja otiska spora trebalo voditi računa o papiru na koji se polaže plodno tijelo gljive. Ukoliko pretpostavljamo da bi otisak spora mogao biti svjetlije nijanse (bijel, krem ili roza) najbolje je koristiti crni papir ili neki drugi njemu sličan, dok sa druge strane logično je da ćemo koristiti bijeli papir kod plodišta koje će dati tamniji otisak, kako bi dobili što jači kontrast između podloge i samog otiska. Na kraju nam ostaje još da izmjerimo veličinu samih spora. Prije svega da napomenem da ja nemam iskustva sa kalibrisanjem mikroskopa i mjerenjem spora, za sada sam se zadovoljio samo fotografisanjem i posmatranjem. Međutim ono što nam je neophodno da bi mogli izvršiti mjerenje spora i podesiti mikroskop je mikrometar, a za sve zainteresirane preporučujem da posjete već navedenu stranicu na kojoj je sve detaljno i jasno objašnjeno.

Puno uspjeha i uživajte u posmatranju i fotografisanju ovog čarobnog mikrosvijeta!
Autor stranice.

Ostali članci u vezi sa mikroskopiranjem:

Video objašnjenje postupka uzimanja spora
Galerija fotografija spora