Mikroskopija

Mikologija i upotreba mikroskopa- U izradi

Veliki broj osoba koji se počnu baviti istraživanjem i upoznavanjem gljiva iz hobija ili na neki drugi način, doći će do trenutka kada za determinaciju većine gljiva makro karakteristike nisu dovoljne (prije svega zahvaljujući razvijanju spoznaje o ozbiljnosti pristupa proučavanju gljiva i interesovanju same individue), pa se upotreba mikroskopa nameće sama po sebi. Tekst koji slijedi pisan je više iz praktičnog iskustva, zasnovanog na korištenoj literaturi i dostupnim resursima.
Neosporna je ujedno i činjenica da sa mikroskopskim analizama, kako mi miko-entuzijasti volimo reći, počinju i prave glavobolje, koje zahtjevaju potpunu predanost i posvećenost, kako bi se postigli željeni rezultati.

Prije nego li počnete sa ozbiljnijim mikro analizama, pomirite se sa činjenicom da će vas u početku, ali i poslije, ma koliko žarko željeli da odgonetetne sve nalaze koje ste prikupili taj dan, besane noći nekad ostaviti bez rješenja i možda još više zamišljenog nego prije, posebno one koji se uhvate u koštac sa nekim od porodica (rodova) karakteristično teških za determinaciju. No ipak, ne dajte se obeshrabriti, dosta toga će se i rješiti, a praksa je najbolja vježba i trening.
Pa šta je to što nam je potrebno za kvalitetne mikro analize i šta je sve bitno promatrati i analizirati?

Prije svega potrebno je istaći da je mikroskop solidne kvalitete neizostavan alat za svakog mikologa (amatera ili profesionalca), odnosno alat koji nas vodi do potpuno novih spoznaja i naučno-istraživačkog načina promišljanja. Pri kupovini i odabiru mikroskopa, uvijek držite distancu od mikroskopa i proizvođača koji garantuju kvalitet, naglašavajući mogućnost uvećanja do 1600, 2000 ili čak i više puta, a sve to za malu svotu novca. Za analiziranje građe i mikro strukture gljiva najčešće se možemo zadovoljiti uvećanjem do 1000 puta (sa imerzionim uljem), odnosno kombinacijom objektiva sa uvećanjem od 100X i okulara koji povećava 10X.
Zadržite se na proizvođačima i brandovima koji garantuju provjeren kvalitet, iza kojih stoji tradicija (Carl Zeiss, Olympus, Nikon,...), a mnogo takvih i prije svega kvalitetnih ćete naći i među ponudom polovnih i korištenih. Za mikroskop je najvažnije da ima dobru i kvalitetnu optiku (koja će rezultirati jasnim i čistim slikama), te svrsishodno osvjetljenje, a klonite se kineskih "no name" igrački, koje vas pokušaju obmanuti na svakom koraku kao što je slučaj i savećinom druge tehnike. Binokularni mikroskop za biološke namjene, kakve nerijetko koriste i na fakultetima za prirodne nauke, će u potpunosti zadovoljiti vaše primarne potrebe (mada je logično da ćete uvijek težiti ka boljem, a novčanik će biti pod stalnim pritiscima). Trinokularni mikroskop je također odličan izbor (prvenstveno za one koji u datom trenutku mogu izdvojiti malo više finansijskih sredstava). U ovom slučaju treći tubus (okular) je predviđen za mikro kameru ili za fotoaparate koji imaju mogućnosti spajanja direktno na okular mikroskopa (adapteri, kovertori ili originalni dijelovi kao što je slučaj kod nekih Nikon-ovih starijih digitalaca - serija Coolpix) što će vam omogućiti direktno i kvalitetno fotografisanje i snimanje onoga što posmatrate. Ovo naravno ni u kom slučaju ne treba biti isključiv uslov, jer se poprilično kvalitetne fotografije mogu dobiti i direktnim prislanjanjem objektiva fotoaparata na okular mikroskopa (sve mikro fotografije korištene u ovom članku su nastale na taj način, uz upotrebu Sony DSC-H2 u makro modu).
Mjerenje dimenzije određenih strukturnih elemenata gljiva je od najvećeg značaja pri provođenju mikroskopskih analiza i determinacija. Mjerenje se obično provodi na način da se izvrši kalibracija mikroskopa i to uz pomoć predmetnog stakla sa mikrometarskom skalom (mikrometar - hiljaditi dio milimetra) na kojem nam je poznata stvarna dužina te skale i podioka na njoj, te okulara (obično 10X) koji posjeduje skalu sa mjernim jedinicama. Posmatrajući skalu na uvećanju od 400 ili 1000 puta odredimo proporciju, odnosno napravimo odnos između mjera na skali okulara i onoj mikrometarskoj na predmetnom staklu. Nakon što utvrdimo odnos između ove dvije skale, odnosno utvrdimo koji ekvivalent u mikrometrima odgovara jednom podioku na skali okulara, poprilično lako ćemo vršiti preračunavanje prilikom mjerenja spora ili drugih mikro karakteristika određene vrste.

Šta treba analizirati?

Hemijski reagensi i njihova upotreba

Pored samog otiska spora/plodišta gljive, koji nam pruža podatke o građi himenija gljive, a sama boja otiska nam olakšava determinaciju (ista boja otiska spora karakteristična za pojedine rodove: pluteus-roza; inocybe, cortinarius-smeđkast ...), možemo reći da postoje dvaglavna indikatora na mikroskopskoj razini koja nam nakon svih vizuelnih zapažanja upotpunjuju determinaciju tamo gdje je to potrebno.
Prvi od tih pokazatelja je sam oblik spora, odnosno njihov izgled pod mikroskopom, koji može varirati od nepravilnog, elipsoidnog,okruglastog, vretenastog, itd, a drugi je njihova veličina (izražava se u mikrometrima koji imaju oznaku µm i predstavljaju milioniti dio metra) i može se reći da uz eventualnu upotrebu određenih hemijskih reagenasa kompletira sve korake, koji su ponekad neophodni kako bi se pojedine vrste determinisale.
Ono što bi još trebalo istaći jeste da bi se prilkom samog postupka uzimanja otiska spora trebalo voditi računa o papiru na koji se polaže plodno tijelo gljive. Ukoliko pretpostavljamo da bi otisak spora mogao biti svjetlije nijanse (bijel, krem ili roza) najbolje je koristiti crni papir ili neki drugi njemu sličan, dok sa druge strane logično je da ćemo koristiti bijeli papir kod plodištakoje će dati tamniji otisak, kako bi dobili što jači kontrast između podloge i samog otiska. Na kraju nam ostaje još da izmjerimo veličinu samih spora. Prije svega da napomenem da ja nemam iskustva sa kalibrisanjem mikroskopa i mjerenjem spora, za sada sam se zadovoljio samo fotografisanjem i posmatranjem. Međutim ono što nam je neophodno da bi mogli izvršiti mjerenje spora i podesiti mikroskop je mikrometar, a za sve zainteresirane preporučujem da posjete već navedenu stranicu na kojoj je sve detaljno i jasno objašnjeno.

Iznad - mikroanaliza Sclerotinia trifoliorum

Rječnik mikroskopije
(Osnovni mikološki pojmovi sa shematskim prikazima)